Performance evaluation of a Sars-CoV-2 rapid test and two automated immunoassays / Avaliação do desempenho de teste rápido e de dois imunoensaios automatizados para Sars-CoV-2

ABSTRACT Introduction: Due to urgency and demand of a response to the Covid-19 pandemic, numerous Sars-CoV-2 immunoassays have been rapidly developed. Objective: This study aimed at assessing the performance of rapid Sars-CoV-2 antibody test in comparison to high-throughput serological assays. Methods: A total of 86 serum samples were evaluated in the three assays: a lateral flow immunoassay - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (WRT) - and two chemiluminescence immunoassays: Elecsys Anti-Sars-CoV-2 (ECLIA), and Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Results: The estimated diagnostic sensitivities of serological tests in the evaluation of serum samples from the epidemiological survey were: WRT 59% [95% confidence interval (CI) 43.4%-72.9%], ECLIA 66.7% (51%-79.4%), and CMIA-IgG 61.5% (47.1%-73%). Meanwhile, the estimated diagnostic specificity was for WRT 78.7% (95% CI 65.1%-88%), ECLIA 72.3% (58.2%-83.1%), and CMIA-IgG 76.6% (74%-95.5%). The sensitivity and specificity values were lower than manufacturers' claimed. Although 16.2% (14/86) of serological results were discordant among the three Sars-CoV-2 serological assays, the degree of agreement by the kappa index was adequate: WRT/CMIA-IgG [0.757 (95% CI 0.615-0.899)], WRT/ECLIA [0.715 (0.565-0.864)], and ECLIA/CMIA-IgG [0.858 (0.748-0.968)]. Conclusion: The serological testing may be a useful diagnostic tool, which reinforces its careful evaluation, and, as well as the correct time to use it.

RESUMEN Introducción: Debido a la urgencia y la demanda de una respuesta a la pandemia de Covid-19, se han desarrollado rápidamente numerosos inmunoensayos del Sars-CoV-2. Objetivo: Este estudio tuvo como objetivo evaluar el rendimiento de la prueba rápida de anticuerpos contra el Sars-CoV-2 en comparación con los ensayos serológicos de alto rendimiento. Métodos: Se evaluaron un total de 86 muestras de suero en los tres ensayos: un inmunoensayo de flujo lateral - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (TRW) - y dos inmunoensayos de quimioluminiscencia: Elecsys Anti-Sars-CoV-2 (ECLIA) y Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Resultados: Las sensibilidades diagnósticas estimadas de las pruebas serológicas en la evaluación de muestras de suero de la encuesta epidemiológica fueron: WRT 59% [intervalo de confianza (IC) del 95%: 43,4%-72,9%], ECLIA 66,7% (51%-79,4%) y CMIA-IgG 61,5% (47,1%-73%). Mientras tanto, la especificidad diagnóstica estimada fue para WRT 78,7% (95% CI 65,1%-88%), ECLIA 72,3% (58,2%-83,1%) y CMIA-IgG 76,6% (74%-95,5%). Los valores de sensibilidad y especificidad fueron más bajos que los declarados por los fabricantes. Aunque el 16,2% (14/86) de los resultados fueron discordantes entre los tres ensayos serológicos del Sars-CoV-2, el grado de concordancia del índice kappa fue adecuado: WRT/CMIA-IgG [0,757 (IC del 95%: 0,615-0,899)], WRT/ECLIA [0,715 (0,565-0,864)] y ECLIA/CMIA-IgG [0,858 (0,748-0,968)]. Conclusión: La prueba serológica puede ser una herramienta diagnóstica útil, lo que refuerza su evaluación cuidadosa, así como el momento adecuado para usarla.

RESUMO Introdução: Em função da urgência e demanda de uma resposta à pandemia do novo coronavírus (Covid-19), vários testes de detecção de anticorpos para a síndrome respiratória aguda grave do coronavírus 2 (Sars-CoV-2) têm sido desenvolvidos. Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho do teste rápido utilizado em um inquérito epidemiológico para Sars-CoV-2 em comparação com outros ensaios sorológicos. Métodos: Foram avaliadas 86 amostras de soro em três ensaios sorológicos: um imunoensaio de fluxo lateral - Wondfo Sars-CoV-2 Antibody Test (TRW) - e dois imunoensaios de quimioluminescência: Elecsys anti-Sars-CoV-2 (ECLIA) e Sars-CoV-2 IgG (CMIA-IgG). Resultados: As sensibilidades diagnósticas estimadas dos testes sorológicos na avaliação dessas amostras foram: TRW 59% [95% intervalo de confiança (IC) 43,4%-72,9%], ECLIA 66,7% (51%-79,4%) e CMIA-IgG 61,5% (47,1%-73%). Enquanto isso, a especificidade diagnóstica estimada para TRW foi 78,7% (95% CI 65,1%-88%), ECLIA 72,3% (58,2%-83,1%) e CMIA-IgG 76,6% (74%-95,5%). Os valores de sensibilidade e especificidade foram inferiores aos afirmados pelos fabricantes. Embora 16,2% (14/86) dos resultados tenham sido discordantes entre os três ensaios serológicos para Sars-CoV-2, o grau de concordância pelo índice Kappa foi adequado: TRW/CMIA-IgG [0,757 (95% IC 0,615-0,899)], TRW/ECLIA [0,715 (0,565-0,864)] e ECLIA/CMIA-IgG [0,858 (0,748-0,968)]. Conclusão: O teste sorológico pode ser uma ferramenta diagnóstica útil, o que reforça sua avaliação criteriosa, bem como o momento correto de sua utilização.

Young age and sex work are associated with HIV seroconversion among transgender women in São Paulo, Brazil

Background: Transgender women worldwide have among the highest prevalence of HIV and the lowest access to prevention among groups at risk. However, few longitudinal studies have directly measured HIV incidence and identified predictors of HIV acquisition among transgender women. Setting: São Paulo, Latin America's largest city. Methods: We conducted a longitudinal study among transgender women in São Paulo. Participants were recruited by a long-chain peer referral process from May 2017 to July 2019. Those age 18 years and older and HIV-negative at baseline were retested every 6 months up to 18 months. HIV incidence was calculated by dividing the number of seroconversions by the person-years (py) of follow-up; 95% confidence intervals (CI) were constructed assuming a Poisson distribution. Conditional maximum likelihood ratios assessed differences in HIV incidence by risk factors. Results: A racial/ethnically diverse sample of 545 transgender women were enrolled. In 485.5 py of follow-up, 13 seroconversions were observed yielding an incidence of 2.68 per 100 py (95% CI 1.43­4.58). HIV incidence was significantly higher among transgender women age 18 to 24 years (rate ratio 3.85, 95% CI 1.24­12.93) and among those who engaged in sex work in the preceding month (rate ratio 5.90, 95% CI 1.71­26.62). Conclusion: HIV transmission continues at a high rate among transgender women in Brazil. Factors such as young age, lower level of education, and limited employment opportunities may lead to dependence upon sex work which in turn increase HIV risk. Transgender-friendly prevention services, particularly programs delivering pre-exposure prophylaxis (PrEP) are urgently needed.

Performance evaluation of HIV infection diagnostic tests / Avaliação do desempenho de testes para diagnóstico da infecção pelo HIV

ABSTRACT Introduction: Many factors can impact the performance of diagnostic assays for the human immunodeficiency virus (HIV) infection, affecting the results of population surveys. Objective: The objective of this study was to evaluate the performance of point-of-care rapid tests (RT) used for HIV diagnosis as compared to conventional tests in blood samples from a population of transvestites and transsexual women. Methods: A total of 1,385 samples with HIV RT results were submitted to Instituto Adolfo Lutz for evaluation by conventional laboratory tests. Results: HIV positivity was confirmed by conventional laboratory tests in 100% of the 240 (17.3%) samples with reactive RT. However, 1,145 (82.7%) samples with non-reactive RT results were evaluated; three (0.3%) tested positive and one (0.1%), indeterminate for HIV. Although a proportion of discordant results were found, the point-of-care RTs showed a high confirmation rate when compared to the serological tests. Conclusion: The data of this study corroborate the importance of adopting effective management tools to ensure quality of HIV infection diagnosis.

RESUMEN Introducción: Muchos factores pueden impactar en el desempeño pruebas para diagnóstico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), comprometiendo los resultados de investigaciones poblacionales. Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de pruebas rápidas (PR) en el punto de atención utilizadas para diagnosticar el VIH en relación con las pruebas convencionales en muestras de sangre de la población de travestis y mujeres transexuales en la ciudad de São Paulo, São Paulo, Brasil. Métodos: Un total de 1.385 muestras con resultados de PR de VIH se remitieron al Instituto Adolfo Lutz (IAL), para ser evaluadas por pruebas de laboratorio convencionales. Resultados: De las 240 (17,3%) muestras que presentaron resultado reactivo en las PR, positividad para VIH se confirmó en el 100% por pruebas de laboratorio convencionales. Sin embargo, de las 1.145 (82,7%) muestras evaluadas con resultado de PR non reactivo, tres (0,3%) se presentaron reactivas y una (0,1%), indeterminada para VIH. Aunque un porcentaje de resultados falsos negativos en las PR ha sido encontrado, las pruebas realizadas en el punto de atención poseen alta tasa de confirmación cuando comparadas con las pruebas serológicas. Conclusión: Los datos de este estudio resaltan la importancia de adoptar herramientas de gestión eficaces para garantizar la calidad del diagnóstico de la infección por VIH.

RESUMO Introdução: Muitos fatores podem impactar no desempenho dos testes para diagnóstico da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), comprometendo os resultados de pesquisas populacionais. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho dos testes rápidos (TR) - point-of-care - utilizados para o diagnóstico do HIV em relação aos ensaios convencionais em amostras de sangue da população de travestis e mulheres transexuais da cidade de São Paulo, São Paulo, Brasil. Métodos: Ao Instituto Adolfo Lutz (IAL), 1.385 amostras com os resultados dos TR do HIV foram encaminhadas para serem avaliadas por testes laboratoriais convencionais. Resultados: Das 240 (17,3%) amostras que apresentaram resultado reagente nos TR, a positividade para HIV foi confirmada em 100% por testes laboratoriais convencionais. Entretanto, das 1.145 (82,7%) amostras com resultado de TR não reagente avaliadas, três (0,3%) apresentaram-se reagentes e uma (0,1%), indeterminada para HIV. Embora uma porcentagem de resultados falso-negativos nos TR tenha sido encontrada, os testes realizados em campo possuem alta taxa de confirmação quando comparados com os testes sorológicos. Conclusão: Os dados deste estudo ressaltam a importância da adoção de ferramentas de gestão eficazes para assegurar a qualidade do diagnóstico da infecção por HIV.

Performance of rapid tests compared to conventional tests used for HIV diagnosis / Desempenho dos testes rápidos em relação aos testes convencionais utilizados no diagnóstico de HIV

ABSTRACT Introduction: Early diagnosis is an important tool for strategies to fight human immunodeficiency virus (HIV) infection. Objective: The main objective of this study is to evaluate the comparability of the results of rapid tests (RT) used for the HIV diagnosis in relation to conventional molecular and serological tests in blood samples from a population of men who have sex with men (MSM), from 12 Brazilian capitals. Material and methods: 591 HIV-1 reactive test samples from 4176 MSM participants were submitted to Instituto Adolfo Lutz (IAL) for evaluation by conventional laboratory tests. From these samples with at least one RT reagent, 522 samples were analyzed, and in 493 (94.4%) the HIV positivity was confirmed, with 33% HIV-1 viral load above 5,000 copies/mL and 67% by the serological tests. A total of 336 (10%) samples with a non-reactive RT result were evaluated by standard serology, four (1.2%) tested positive for HIV. Results and conclusion: The results showed a high percentage of samples with confirmed HIV positivity in the conventional laboratory tests, as well as some non-reactive results that were confirmed positive, indicating some limitations of the RT single-step method. Therefore, the serological tests had a fundamental role in clarifying the diagnosis.

RESUMO Introdução: O diagnóstico precoce é um importante instrumento para estratégias de combate à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Objetivo: O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a comparabilidade do resultado de testes rápidos (TR) utilizados para o diagnóstico de HIV em relação a testes moleculares e sorológicos convencionais em amostras de sangue de população de homens que fazem sexo com homens (HSH) de 12 capitais brasileiras. Material e métodos: Foram encaminhadas ao Instituto Adolfo Lutz (IAL), 591 amostras com resultado reagente no TR HIV dos 4176 HSH participantes para serem avaliadas pelos testes laboratoriais convencionais. Dessas amostras com pelo menos um TR reagente, 522 amostras foram analisadas e em 493 (94,4%) confirmou-se a positividade para HIV, sendo 33% pela carga viral HIV-1 acima de 5.000 cópias/ml e 67% pelos testes sorológicos. Foram avaliadas pela sorologia convencional, 336 (10%) amostras com resultado de TR não reagente; quatro (1,2%) apresentaram-se reagentes para HIV. Resultados e conclusão: Os resultados mostraram elevado percentual de amostras com a positividade confirmada para HIV nos testes laboratoriais convencionais, bem como alguns resultados negativos que se confirmaram positivos, mostrando algumas limitações do método único do TR, destacando-se aos exames sorológicos papel fundamental à elucidação do diagnóstico.

Effect of multiple freeze-thaw cycles on the stability of positive anti-treponemal serum samples / Efeito dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade de amostras de soro antitreponêmico positivo

ABSTRACT Introduction: Biological samples have long been used in multiple laboratory investigations, and this procedure has been an issue of concern, as the samples are submitted to repeated freeze-thaw cycles, which may affect the results of a particular immunodiagnostic assay, due to the occurrence of physical damage to the antibody of interest. Objective: This study aimed at investigating the impact of successive freeze-thaw cycles on the stability of serum samples stored at -20ºC regarding the reactivity of anti-treponemal antibodies. Methods: At the Immunology Center-Instituto Adolfo Lutz (IAL), the analyzed serum samples analyzed were prepared and established as reference material for anti-treponemal immunodiagnostic assays. Sera stability was evaluated by chemiluminescence assay in samples submitted to 25 successive freeze-thaw cycles, ranging from 6 to 174 cycles. Results: Neither statistically significant effect on the reactivity of anti-treponemal antibodies (p-value > 0.05), nor adverse effect were observed in weakly reactive samples, such as the occurrence of false-negative results. Conclusion: It was shown that 174 freeze-thaw cycles of anti-treponemal sera did not affect the stability and the quality of samples, when evaluated by chemiluminescence assay.

RESUMO Introdução: As amostras biológicas têm sido utilizadas em múltiplas investigações por um longo período de tempo, e existe a preocupação a respeito dos seus repetidos ciclos de congelamento e descongelamento que podem afetar os resultados de determinado ensaio imunodiagnóstico pela ocorrência de dano físico do anticorpo de interesse. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar o impacto dos sucessivos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade das amostras de soro armazenadas a -20ºC quanto à reatividade de anticorpos antitreponêmicos. Métodos: No Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL), as amostras de soro analisadas foram preparadas e estabelecidas como material de referência de teste imunodiagnóstico antitreponêmico. A estabilidade dos soros foi avaliada por meio de ensaio de quimioluminescência, em amostras submetidas a 25 sucessivos ciclos de congelamento e descongelamento, que variaram de 6 a 174 ciclos. Resultados: Não houve efeito estatisticamente significante na reatividade dos anticorpos antitreponêmicos (valor de p > 0,05), e nenhum efeito adverso foi observado nas amostras fracamente reagentes, como a ocorrência de resultados falso negativos. Conclusão: Foi demonstrado que os 174 ciclos de congelamento e descongelamento dos soros antitreponêmicos não afetaram a estabilidade e a qualidade das amostras, quando avaliados por meio do ensaio de quimioluminescência.

Study on the stability of HIV and syphilis reference materials under varied temperature conditions during their transportation / Estudo da estabilidade de materiais de referência para HIV e sífilis sob condições de temperatura variadas durante o transporte

ABSTRACT Introduction: The objective of this study was to evaluate the short-term stability of the serum samples used as internal quality control (IQC) of human immunodeficiency virus (HIV)/acquired immunodeficiency syndrome (Aids) and syphilis immunodiagnostic assays. These samples were produced at the Center of Immunology-Instituto Adolfo Lutz (IAL), and they were distributed to laboratories participating in the IAL Quality Control Program. Method: The sera analyzed by chemiluminescence assay were stored at varied temperature conditions: from 2ºC to 8ºC (refrigerator), from 15ºC to 25ºC (room temperature), at 37ºC (incubator) and at -20ºC (reference temperature) for 12 and 24 hours. Results: Comparative analysis of IQC results for anti-HIV and anti-T. pallidum (anti-treponemal) showed stability in the reference temperature and at the various simulated temperatures for transporting the samples at the established lengths of time. The data from the simple linear regression analysis of negative serum samples (incubator/24 hours) and in one batch of HIV IQC (room temperature/24 hours) were statistically significant at the level of 5% (p-value < 0.05). Conclusion: The sera presented necessary requirements as reference material to be transported to laboratories at refrigeration temperature (2ºC to 8ºC), at the maximum shipping time of 12 hours.

RESUMO Introdução: O objetivo deste estudo foi avaliar a estabilidade de curta duração de amostras de soro utilizadas como controle de qualidade interno (CQI) de testes imunodiagnósticos de vírus da imunodeficiência humana (HIV)/síndrome da imunodeficiência adquirida (Aids) e sífilis, produzidas no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL) e distribuídas aos laboratórios participantes do Programa de Controle de Qualidade do IAL. Método: Os soros analisados por meio de ensaio de quimioluminescência foram armazenados em diferentes condições de temperaturas: de 2ºC a 8ºC (geladeira), de 15ºC a 25ºC (ambiente), 37ºC (estufa) e de -20ºC (referência) durante 12 e 24 horas. Resultados: A análise comparativa dos resultados do CQI HIV e T. pallidum (antitreponêmico) demonstrou que os materiais permaneceram estáveis, tanto na temperatura de referência quanto nas diferentes temperaturas simuladas para o transporte, no período de tempo estabelecido. No entanto, os resultados da análise de regressão linear simples das amostras de soro negativas (estufa/24 horas) e de um lote de CQI HIV (ambiente/24 horas) foram estatisticamente significativos ao nível de 5% (valor de p < 0,05). Conclusão: Os soros apresentaram requisitos necessários de material de referência para serem transportados aos laboratórios em temperatura de refrigeração (2ºC a 8ºC) no tempo máximo de 12 horas.

Performance validation of western blot for anti-HIV antibody detection in blood samples collected on filter paper (DBS) / Validação de desempenho do western blot para detecção de anticorpos anti-HIV em amostras de sangue coletadas em papel-filtro (DBS)

ABSTRACT Introduction: For conducting field studies on human immunodeficiency virus (HIV) serodiagnosis, the use of samples collected on filter paper [dried blood spot (DBS)] is profitable owing to the simplicity in handling and delivering them. Because of these characteristics, the use of DBS is recommended for studies in which the goal is to increase the population access to diagnostic testing, including HIV infection screening. For HIV diagnosis, the conventional strategy firstly uses an enzyme immunoassay as screening test, and the positive sample is confirmed on a complementary assay, as western blotting (WB). Objective: This study aimed at evaluating the analytical performance of WB assay for analyzing DSB samples. Method: One hundred eighteen blood samples collected in filter paper were analyzed by a modified WB. These samples derived from the SampaCentro Study, and they were HIV-antibody-positive in a screening test. In order to assess the reliability of these results, the assay performance was previously certified by employing the sample panel (reference panel) of Instituto Adolfo Lutz (IAL), which consisted of whole blood and plasma paired samples. Results: All of the DBS samples [100% (118/118)] showed the band pattern compatible with the criterion for HIV positivity established by the Ministry of Health. To validate the WB testing, the reciprocal relationship between antibody reactivity of DBS samples and of the respective plasma samples was investigated. Conclusion: WB optimization allowed the achievement of accurate results, and the easy DBS sample collection, transportation and storage will support the use of this immunodiagnostic technique for conducting HIV/acquired immunodeficiency syndrome (Aids) epidemiological surveys.

RESUMO Introdução: Em estudos de campo é vantajoso o emprego de amostras coletadas em papel de filtro (DBS) pela simplicidade em manuseá-las e transportá-las. Essas características colocam a tecnologia de DBS em posição de destaque nas pesquisas que buscam aumentar o acesso da população aos testes diagnósticos, incluindo os testes sorológicos para vírus da imunodeficiência humana (HIV). A estratégia convencional para o diagnóstico da infecção pelo HIV é utilizar um teste imunoenzimático como primeiro teste e, quando este for reagente, um teste complementar, como o western blot (WB), para confirmar a reatividade da amostra. Objetivo: Neste estudo foi avaliado o desempenho analítico do ensaio WB em amostras DBS. Método: As 118 amostras de sangue coletadas em papel-filtro, provenientes do estudo SampaCentro e reagentes para anticorpos anti-HIV no ensaio de triagem, foram analisadas no WB modificado. Para conferir a confiabilidade a esses resultados, o desempenho do ensaio foi previamente validado por meio de painel de amostras do Instituto Adolfo Lutz (IAL) (painel de referência), composto por amostras pareadas de sangue total e plasma. Resultados: Todas as amostras DBS [100% (118/118)] apresentaram o padrão de bandas compatível com o critério de positividade para HIV preconizado pelo Ministério da Saúde. Na validação do WB, foi averiguada a reciprocidade da reatividade dos anticorpos das amostras DBS e de suas respectivas amostras de plasma. Conclusão: A otimização do WB possibilitou a obtenção de resultados confiáveis, e a facilidade de execução, coleta, transporte e armazenamento de amostra DBS poderá viabilizar a utilização dessa técnica imunodiagnóstica em inquéritos epidemiológicos de HIV/síndrome da imunodeficiência adquirida (Aids).

Blood collection on filter paper for HIV antibodies detection: experience of SampaCentro Project / Colheita de sangue em papel filtro para detecção de anticorpos anti-HIV: experiência do Projeto SampaCentro

Introduction: Blood samples collected on filter paper (dried blood spot [DBS]) is an immunoassay that has been used for antibodies screening. Objective: To evaluate the strategy of DBS blood collection for detection of HIV antibodies, evaluation of Q-Preven HIV 1 + 2 - DBS kit lot, and to analyze the stability of DBS samples. Methods: Blood collection on DBS was performed according to World Health Organization (WHO) recommendations. The evaluation of the kit lot for HIV antibodies detection was performed using delta (d) values from the results of 774 DBS samples from volunteers men who have sex with men (MSM) recruited in the central region of São Paulo city, Brazil. Results: DBS blood collection was performed without complications. The positive (5.26) and negative (5.23) delta values allowed to clearly differentiate HIV antibodies reactive and non-reactive samples. We observed good performance of the kit lot and samples were stable on DBS form. Conclusion: Blood collection on DBS is feasible for the study of MSM population and is suitable for laboratory routine. The overall performance of Q Preven HIV-1 + 2 - DBS kit was satisfactory, having reached the quality levels required for the development of this study. .

Introdução: As amostras de sangue colhidas em papel filtro (DBS) têm sido utilizadas na triagem de anticorpos por meio de imunoensaios. Objetivos: Avaliar a estratégia de colheita de sangue em DBS para detecção de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV), verificar o lote do kit Q-Preven HIV 1+2 - DBS e analisar a estabilidade das amostras DBS. Métodos: A colheita de sangue em DBS foi realizada conforme recomendações da Organização Mundial da Saúde (OMS). A avaliação do lote do kit para detecção de anticorpos anti-HIV foi feita por meio do valor de delta a partir dos resultados das 774 amostras DBS provenientes de voluntários homens que fazem sexo com homens (HSH) recrutados na região central da cidade de São Paulo, Brasil. Resultados: A colheita de sangue em DBS foi realizada sem intercorrências. O indicador delta positivo (5,26) e negativo (5,23) permitiu discriminar com clareza amostras anti-HIV reagentes e não reagentes. O lote do kit apresentou bom desempenho e as amostras permaneceram estáveis na forma de DBS. Conclusão: A colheita de sangue em DBS mostrou-se factível para o estudo realizado com a população HSH e foi adequada para a rotina laboratorial. O desempenho global do kit Q-Preven HIV 1+2 - DBS foi satisfatório, com a qualidade requerida para o desenvolvimento deste estudo. .

Estabilidade dos anticorpos anti-HIV em amostras de soro armazenadas por períodos de dois a dezoito anos / Stability of anti-HIV antibodies in serum samples stored for two to eighteen years periods

Introduction: The antibodies have an important role in the serodiagnosis, constituting the most widely used biomarkers to detect and confirm various diseases. Objective: To investigate the reproducibility of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity, to assess the stability of the sera samples stored at -20ºC for two to eighteen years. Method: Sera were collected in the period 1988-2004 for routine anti-HIV antibodies diagnostic testing. The remaining samples stored at -20ºC, were analyzed in this study. Serum sample stability was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), indirect immunofluorescence assay (IFA), and Western blot (WB) for detecting anti-HIV antibodies. The previously found results (1988-2004) and those obtained in 2006 were subjected to Kappa index analysis. Result: In the period 1988-to 2004, the degree of concordance of the ELISA/EIA, IFA and WB results were considered, good (k = 0.80), regular (k = 0.35), and good (k = 0.63), respectively. Conclusion: Regarding HIV serologic test, the serum samples were stable for 18 years in ELISA/EIA and for 4 years in IFA technique, however, for the WB methodology it was not possible to determine the time of stability of the anti-HIV antibodies...

Introdução: Os anticorpos possuem papel fundamental no sorodiagnóstico e constituem os mais difundidos biomarcadores empregados na detecção e na confirmação de diversas doenças. Objetivo: Verificar a reprodutibilidade dos resultados de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV) para avaliar a estabilidade dos soros armazenados a -20ºC durante período de dois a dezoito anos. Método: Os soros utilizados foram provenientes de amostras remanescentes da rotina diagnóstica para detecção de anticorpos anti-HIV, no período de 1988 a 2004, os quais estavam armazenados em freezer a -20ºC. A estabilidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), imunofluorescência indireta (IFI) e Western blot (WB) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados dos testes realizados anteriormente (1988-2004) e os obtidos em 2006 foram submetidos à análise do índice Kappa. Resultado: No período de 1988-2004, os graus de concordância dos resultados do ELISA/EIA, IFI e WB foram considerados, respectivamente, bom (k = 0,80), regular (k = 0,35) e bom (k = 0,63). Conclusão: No que diz respeito à sorologia para HIV, as amostras de soro foram estáveis por 18 anos no ELISA/EIA e por quatro anos na técnica de IFI, no entanto, para a metodologia de WB, não foi possível determinar o tempo de estabilidade dos anticorpos anti-HIV...

Estudo de homogeneidade dos soros utilizados em controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids / AidsHomogeneity study of the internal quality control sera for immunodiagnosis of HIV/AIDS

Introduction: The present study reports the data from the first homogeneity assessment of samples composing the serum panels produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, São Paulo. These samples have been distributed to the public laboratories and those partaking in the Brazilian Unified Health System, and to the participants in the Internal Quality Control Program for human immunodeficiency virus (HIV) antibody (Ab) testing. Objective: To assess the homogeneity of serum samples in panels from different lots for HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnosis by using the statistical method to ensure quality of the reference material. Method: Sera homogeneity was evaluated by means of enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) for detection of HIV Ab, and the one-way analysis of variance was employed for analyzing the data. No statistically significant differences were found among the several serum vials. Conclusion: The sera dispensed in the vials were homogeneous in the respective lots...

Introdução: No presente estudo estão descritos os resultados das primeiras análises feitas sobre a avaliação da homogeneidade das amostras componentes de painéis de soros produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz e distribuídos aos laboratórios públicos e conveniados ao Sistema Único de Saúde e participantes do Programa de Controle de Qualidade Interno para imunodiagnóstico de vírus da imunodeficiência humana/síndrome da imunodeficiência adquirida (HIV/AIDS). Objetivo: Avaliar a homogeneidade das amostras de soro componentes de painéis de diferentes lotes para imunodiagnóstico de HIV/Aids por meio de método estatístico para garantir a qualidade do material de referência. Material e método: A homogeneidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunoassay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados foram submetidos à análise de variância fator único. Não foram encontradas diferenças significativas entre os resultados obtidos para os diversos frascos de soro. Conclusão: As amostras distribuídas nos frascos foram homogêneas entre si nos respectivos lotes...

Estabilidade dos soros para o controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/AIDS / Study on the stability of internal quality control sera for HIV/AIDS immunodiagnostic tests

Introduction: The use of reference materials in order to assure and perform the quality control of analytical measurements is a requirement in clinical laboratories. Objectives: Stability of serum samples, kept frozen at -20°C for long-term storage and at varied temperatures during short periods, was evaluated by investigating the persistency of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity on enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot and indirect immunofluorescence assays. Method: The analyzed sera were part of serum panels (comprised of anti-HIV positive and negative samples), produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, which have been the reference specimens for producing the internal quality assurance sera of HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnostic assays. Sera stability was assessed in samples stored at -20°C for 56 weeks, and at various temperature conditions: from 2°C to 8°C (refrigerator), from 15°C to 25°C (room temperature), at 37°C (incubator) and at -80°C (freezer) for 24 and 48 hours. The statistical analyses on HIV-negative serum samples (long-term storage) were significant (p < 0.05), and neither adverse effects on these samples as the occurrence of false-positive results nor false-negative results in HIV antibody positive sera were found in both studies. Conclusion: It was possible to conclude that the reference material remained stable for 48 hours at different temperatures (short-term) and it remained stable at -20°C for 56 weeks (long-term)...

Introdução: A utilização de materiais de referência para assegurar e desempenhar o papel de controle de qualidade das medições analíticas é requisito em laboratórios clínicos. Objetivo: O presente estudo avaliou a estabilidade das amostras de soro, armazenadas a -20°C por um longo período de tempo e durante curto prazo em diferentes temperaturas, quanto à invariabilidade da reatividade de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV), por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot e imunofluorescência indireta. Método: As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada em amostras armazenadas a -20°C por 56 semanas e nas diferentes condições de temperaturas: de 2°C a 8°C (geladeira), de 15°C a 25°C (ambiente), 37°C (estufa) e -80°C (freezer), durante 24 e 48 horas. Os resultados das análises de tendência das amostras de soro HIV negativo (armazenamento de longo prazo) foram significantes (p < 0,05) e nenhum efeito adverso foi observado nessas amostras, como a ocorrência de resultados falso-positivos, tampouco foram detectados resultados falso-negativos em amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV em ambas as avaliações. Conclusão: Foi possível concluir que o material de referência manteve-se estável por 48 horas nas diferentes temperaturas (curto prazo) e permaneceu estável a -20°C por 56 semanas (longo prazo)...

Avaliação dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade dos soros para a detecção de anticorpos anti-HIV / Assessing the effect of multiple freeze-thaw cycles on the stability of serum samples for anti-HIV antibody detection

No presente estudo foi investigado o impacto dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade das amostras de soro estocadas a -20 °C quanto à reatividade de anticorpos anti-HIV. As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia – Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids. A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada por meio de ELISA/EIA, Western blote imunofluorescência indireta, em amostras submetidas a 11 consecutivos ciclos de congelamento e descongelamento, que variaram de 7 a 60 ciclos. Nenhum efeito estatisticamente significante na reatividade dos anticorpos específicos foi observado. Portanto, o procedimento de congelamento e descongelamento, em até 60 ciclos, não causou efeitos adversos na reatividade das amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV, sem ocorrência de reações falso-negativas, tampouco de resultados falso-positivos em amostras negativas para HIV.

Implementation of a strategy for improving the serological diagnosis of HIV/AIDS by introducing the internal quality control / Implantação de estratégia para a melhoria do diagnóstico sorológico de infecção por HIV/AIDS pela introdução de controle de qualidade interno

The present study reports the data resulted from the first evaluation on the performance of the laboratory units of the HIV/AIDS Diagnosis Laboratory Network of the State of São Paulo, which have agreed to participate in the Internal Quality Control scheme for HIV antibody testing (HIV-IQC) at the respective routine diagnostic services. From April 2009 to February 2010, the HIV-IQC serum panels were distributed to 37 laboratories of the Sub-Network of São Paulo State. Of these, 27 (73.0%) sent the forms back to the IAL-Central Lab with the achieved results from the IQC in HIV EIA/ELISA kits. Among 22 (59.5%) laboratories, which perform additional HIV antibody testing by indirect immunofluorescence-based assay (HIV-IFA), 11 (50.0%) carried out the HIV-IFA IQC. As identical data were reported from procedures by employing the IQC samples in different batches of EIA/ELISA kits from the same manufacturers, it may inferred that the laboratories have complied with the recommended procedures, and that the standardized conduct has been followed. Furthermore, the analyses on reported results indicated that the majority of commercial diagnostic kits used for routine HIV antibody testing at the Network laboratories show good quality and reproducibility.

No presente estudo estão descritos os resultados das primeiras análises feitas quanto ao desempenho das unidades componentes da Rede de Laboratórios de Diagnóstico de HIV/AIDS do Estado de São Paulo, que concordaram em participar da implantação do controle de qualidade interno para o diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV (CQI-HIV) nos respectivos serviços referentes à detecção de anticorpos anti-HIV. De abril de 2009 a fevereiro de 2010 foram distribuídos os painéis de soro CQI-HIV para 37 laboratóriosda sub-rede do Estado de São Paulo. Desses, 27 (73,0%) enviaram ao IAL Central os formulários com os resultados obtidos no CQI-HIV para EIA/ELISA. Entre os 22 (59,5%) laboratórios que realizam também oensaio de IFI HIV-1 na rotina diagnóstica, 11 (50,0%) executaram o sistema CQI para esse teste. Em vistados laboratórios participantes terem apresentado idênticos dados na determinação de reatividade ideal dasamostras do painel para os conjuntos diagnósticos procedentes de mesmas firmas produtoras e de diferenteslotes, pode-se inferir que os laboratórios seguiram os procedimentos preconizados, o que demonstra aadequada execução da conduta padronizada. Ademais, a análise dos resultados obtidos indica que osconjuntos diagnósticos utilizados pela rede de laboratórios são de boa qualidade e de boa reprodutibilidade.

Condições higiênico-sanitárias da pimenta do reino em pó (Piper nigrum L) com o emprego de duas diferentes técnicas para detecção de sujidades leves / Assessment of hygienic conditions of ground pepper (Piper nigrum L) by means of two methodologies for detecting the light filth

A pimenta do reino deve ser colhida, processada, embalada em condições ideais para evitar a presença de matérias estranhas. Com o objetivo de avaliar as condições higiênicas da pimenta do reino em pó, comercializada em São Paulo, foram analisadas 22 amostras por meio de duas diferentes técnicas no período de maio a setembro de 2006. Para a análise de sujidades leves foi utilizada a técnica de flutuação segundo AOAC e ensaio imunoenzimático – ELISA. Observou-se que 100% das amostras continham fragmentos de insetos e em várias amostras foram demonstrados mais de um tipo de matéria estranha; e 23% das amostras mostraram ser impróprias ao consumo em virtude da presença de pelos de roedor. Para realizar o ELISA, foram adicionados os padrões constituídos de 1, 2, 4, 8 e 10 insetos para estimar o número de insetos nas amostras em análise, por meio de valores de densidade óptica (DO). Verificou-se que 36,4% das amostras apresentaram valores de DO próximos aos correspondentes ao do padrão 8 insetos, 40,9% ao do padrão 4 insetos, 18,2% ao do padrão 10 e 4,5% ao do padrão 2 insetos. A técnica descrita na AOAC mostra ser mais apropriada, em função de sua eficiência de detecção de insetos, bem como de outras matérias estranhas, enquanto que o ELISA detecta especificamente a miosina presente no músculo dos insetos, cuja degradação ocorre com o passar do tempo.

Manual técnico para implementação do controle de qualidade interno nos procedimentos laboratoriais para diagnóstico sorológico da infecção pelo hiv no Estado de São Paulo / Technical guidelines for implemeting the internal quality control on HIV infection serologic diagnosis in São Paulo State

A Portaria MS/GM nº 59, de 28 de janeiro de 2003, normatizou a sub-rede de laboratórios do Programa Nacional de DST/Aids e estabeleceu o Programa de Controle da Qualidade Analítica do Diagnóstico Laboratorial da Infecção por HIV (PCQA HIV), visando implementar ações para a melhoria e garantia da qualidade do diagnóstico laboratorial. De acordo com os dispositivos desta Portaria, todos os laboratórios públicos e os conveniados ao Sistema Único de Saúde (SUS) que realizam testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-HIV devem, obrigatóriamente, participar do PCQA HIV. No âmbito do Estado de São Paulo, cumprindo as atribuições de Laboratório Central de Saúde Pública (LACEN), o Instituto Adolfo Lutz - Laboratório Central (IAL Central) coordena o PCQA HIV na sub-rede estadual e criou, em 2004, o Grupo Permanente GPI PCQA HIV/SP, para implementação deste programa. Em 2005, com apoio do Programa Estadual de DST/Aids, o IAL Central realizou oficinas de treinamento para a rede de referência regional/municipal de laboratórios públicos do Estado de São Paulo, com a finalidade de promover ações e capacitar recursos humanos para a implantação de sistemas para a gestão da qualidade dos procedimentos analíticos dos testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-HIV...

Manual técnico para implementação do controle de qualidade interno nos procedimentos laboratoriais para diagnóstico sorológico da infecção pelo hiv no Estado de São Paulo

A Portaria MS/GM nº 59, de 28 de janeiro de 2003, normatizou a sub-rede de laboratórios do Programa Nacional de DST/Aids e estabeleceu o Programa de Controle da Qualidade Analítica do Diagnóstico Laboratorial da Infecção por HIV (PCQA HIV), visando implementar ações para a melhoria e garantia da qualidade do diagnóstico laboratorial. De acordo com os dispositivos desta Portaria, todos os laboratórios públicos e os conveniados ao Sistema Único de Saúde (SUS) que realizam testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-HIV devem, obrigatóriamente, participar do PCQA HIV. No âmbito do Estado de São Paulo, cumprindo as atribuições de Laboratório Central de Saúde Pública (LACEN), o Instituto Adolfo Lutz - Laboratório Central (IAL Central) coordena o PCQA HIV na sub-rede estadual e criou, em 2004, o Grupo Permanente GPI PCQA HIV/SP, para implementação deste programa. Em 2005, com apoio do Programa Estadual de DST/Aids, o IAL Central realizou oficinas de treinamento para a rede de referência regional/municipal de laboratórios públicos do Estado de São Paulo, com a finalidade de promover ações e capacitar recursos humanos para a implantação de sistemas para a gestão da qualidade dos procedimentos analíticos dos testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-HIV...